安徽农业科学

2011, v.39;No.348(23) 14120-14122

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抑制14-3-3ζ表达的siRNA及其重组腺相关病毒载体的构建
Construction of Recombinant Adeno-associated Virus Vector Containing a siRNA Targeting 14-3-3ζ

袁亚丽;曹以诚;高强;杨磊;

摘要(Abstract):

[目的]通过构建靶向14-3-3ζ的siRNA及其报告基因EGFP的重组腺相关病毒载体,包装出含有目标基因的腺相关病毒。[方法]设计靶向14-3-3ζ的siRNA,插入到psiRNA质粒H1启动子下游,Western-Blot检测siRNA的抑制效果。从psiRNA质粒上扩增H1-si-ζ基因表达单位亚克隆到AAV表达质粒AAV-MCS-EGFP的Mlu1酶切位点,构建重组质粒pAAV-14-3-3ζ-EGFP。重组质粒与包装质粒pAAV-RC和辅助质粒pHelper用磷酸钙法共转染AAV-293细胞制备重组病毒rAAV-14-3-3ζ-EGFP。重组病毒感染HT1080细胞,荧光显微镜检测病毒介导的EGFP表达。[结果]通过酶切鉴定和测序确定重组病毒载体pAAV-14-3-3ζ-EGFP已构建成功。病毒感染的细胞中检测到绿色荧光,表明重组病毒成功包装。[结论]成功包装出重组腺相关病毒AAV-14-3-3ζ-EGFP,为今后利用腺相关病毒载体进行14-3-3ζ相关的体内、外研究提供了试验基础。

关键词(KeyWords): 14-3-3ζ;腺相关病毒;AAV-293细胞;EGFP;Western-Blot

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation):

作者(Author): 袁亚丽;曹以诚;高强;杨磊;

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DOI: 10.13989/j.cnki.0517-6611.2011.23.089

参考文献(References):

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