安徽农业科学

2017, v.45;No.577(36) 131-134+153

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一株石油烃降解菌TY22烷烃羟化酶基因的克隆及功能研究
Cloning and Functional Analysis of Alkane Hydroxylase Gene of a Petroleum Hydrocarbon Degrading Bacteria TY22

唐赟;敬珊;邹书珍;冀黎骏;杨雪;余小丽;

摘要(Abstract):

[目的]对一株石油烃降解菌TY22的烷烃羟化酶基因alkB克隆测序,并对其外源表达和功能进行研究。[方法]PCR扩增获得alkB基因部分序列,再根据该序列通过染色体步移技术,最终获得完整CDS序列。将alkB基因与pET21b(+)载体构建重组质粒,并转入E.coli BL21(DE3)进行表达。再将alkB基因克隆至pCom8载体中,分别转入E.coli GEc137(p GEc47△B)和Pseudomonas fluorescens KOB2Δ1进行基因功能的互补试验。[结果]染色体步移获得了1 236 bp的烷烃羟化酶基因完整CDS序列(Gen Bank Accession:KU867870)。诱导表达发现,重组菌在0.1 mmol/L IPTG、30℃条件下诱导培养6 h的表达效果最佳,得到与预期相符的46 kDa蛋白。基因功能互补试验发现,重组菌能在以C12~C16为唯一碳源的培养基中生长。[结论]TY22菌株的烷烃羟化酶基因完整CDS序列全长1 236 bp,能氧化C12~C16的中长链烷烃,并能在大肠杆菌中有效表达。

关键词(KeyWords): 石油烃降解菌;烷烃羟化酶;表达;功能

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 四川省科技厅应用基础研究项目(2014JY0196);; 四川省南充市科技局重点项目(16YFZJ0040)

作者(Author): 唐赟;敬珊;邹书珍;冀黎骏;杨雪;余小丽;

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DOI: 10.13989/j.cnki.0517-6611.2017.36.041

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