安徽农业科学

2008, (18) 7589-7590

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转基因番茄植株Mi1.2表达水平的Real Time PCR检测体系的建立
Establishment of Real Time PCR Detection System of Expression level of Mi1.2 Transgenic Tomato Plant

魏振林;田志环;焦传珍;董玲;

摘要(Abstract):

[目的]为转基因番茄植株的高通量筛选奠定基础。[方法]利用CTAB法提取番茄叶片总RNA进行Real Time PCR扩增,分析转Mi1.2基因的番茄植株表达水平的检测体系。[结果]提取RNA的A260/A280为1.78~1.88,RNA无明显降解。在严谨扩增条件下,引物SYBR2的扩增效率高于SYBR1。Mg2+的适宜浓度为2.0 mg/L。Real Time PCR扩增产物具有良好的特异性,熔解曲线特异峰出现在84.5℃附近,在熔解曲线略低于83℃附近有极微弱的非特异峰。因此在定量反应中信号检测步骤应放在84℃。以4种不同模板分子数条件下扩增曲线Ct值得到的回归方程为Y=-3.78×log(copynumber)+39.50,相关系数为0.998。[结论]该试验获得的Real Time PCR体系可用于转基因植株表达水平的检测。

关键词(KeyWords): Real Time PCR;检测体系;转基因番茄植株;熔解曲线

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation):

作者(Author): 魏振林;田志环;焦传珍;董玲;

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DOI: 10.13989/j.cnki.0517-6611.2008.18.086

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