安徽农业科学

2006, (22) 5806-5807+5855

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马氏珠母贝ISSR-PCR反应条件优化

吕林兰;杜晓东;王嫣;石耀华;王爱民;

摘要(Abstract):

采用ISSR技术对马氏珠母贝进行PCR扩增,100个引物筛选出48个呈阳性反应的引物。对影响ISSR-PCR反应的Mg2+浓度、模板浓度T、aq酶浓度、引物退火温度和反应循环数进行了优化,并对甲酰胺对试验的影响进行了初步探讨。结果表明:优化的马氏珠母贝ISSR反应条件为①反应体系2.5μl 10×buffer,镁离子浓度1.5 mmol/L,Taq酶1.0 U,200 nmmol/L ISSR引物,模板浓度为50 ng/μl,2%甲酰胺,0.10 mmol/L dNTP,加双蒸水至总体积25μl;②反应程序预变性94℃,5 min;变性94℃,30 s;退火52℃,1 min;延伸72℃,2 min;39个循环;延伸72℃,7 min。

关键词(KeyWords): 马氏珠母贝;ISSR;优化;条件

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家自然科学基金资助项目(39969003,30360084);; 国家863计划项目(2002AA603022)

作者(Author): 吕林兰;杜晓东;王嫣;石耀华;王爱民;

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DOI: 10.13989/j.cnki.0517-6611.2006.22.021

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