安徽农业科学

2008, (04) 1373-1374

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刺梨RNA的有效提取及Actin基因片段的克隆
Extraction of Total RNA from Rosa roxburghii Tratt and the Cloning of Actin Gene Fragment

杨玉;安华明;刘明;黄伟;李德燕;王立新;刘厚宇;李顺雨;

摘要(Abstract):

[目的]为刺梨的分子生物学研究奠定技术基础。[方法]分别采用改进的CTAB-LiCl法和CTAB法提取刺梨果实中的总RNA和基因组DNA。对刺梨总RNA进行反转录,生成cDNA第1链。根据GenBank上的蔷薇科肌动蛋白(Actin)基因保守序列设计1对跨内含子引物Actin1和Actin2,以cDNA第1链和基因组DNA为模板进行RT-PCR扩增。将含有目的片段的凝胶进行回收纯化,克隆到PMD18-T载体上,转化大肠杆菌TG1感受态细胞,选取带有目的片段的重组质粒进行测序和序列分析。[结果]将目的片段回收后克隆于T载体,可获得298 bpActin基因的cDNA序列。克隆所得核苷酸序列与蔷薇、桃和葡萄的核苷酸序列相似性达83%,与富士苹果、甜菜等的相似性也超过80%。刺梨Actin基因编码的氨基酸序列与梨的相似性最高(达97%),其次是葡萄、花生、大豆、棉花和马铃薯,而与水稻、拟南芥等的相似性也达90%以上。[结论]Actin基因跨内含子,用该Actin基因片段作内标可以减少DNA污染。

关键词(KeyWords): 刺梨;肌动蛋白;克隆

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家自然科学基金项目(30660114);; 贵州省自然科学基金项目(20062038)

作者(Author): 杨玉;安华明;刘明;黄伟;李德燕;王立新;刘厚宇;李顺雨;

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DOI: 10.13989/j.cnki.0517-6611.2008.04.006

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