安徽农业科学

2010, v.38;No.321(32) 18224-18226

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猪圆环病毒2型ORF2基因原核表达蛋白间接ELISA检测方法的建立
Establishment of an Indirect ELISA for PCV2 Recombinant Capsid Protein Expressed in E. coli

高超;肖冲;高瑞峰;胡桂学;

摘要(Abstract):

[目的]建立一种检测PCV2血清抗体的间接ELISA方法。[方法]从已构建的克隆质粒pMD-ORF2上酶切回收ORF2基因的羧基端部分ORFc片段,克隆到pGEX-6P-1表达载体上,构建原核表达质粒pGEX-ORFc,转化入大肠杆菌BL21进行原核表达,用Western-blot法检测纯化蛋白,将其作为抗原包被酶标板,优化间接ELISA试验条件,从而建立检测PCV2血清抗体的间接ELISA方法。[结果]重组表达质粒的酶切鉴定证明已成功构建重组表达质粒pGEX-ORFc,其在E.coliBL21中诱导5、6 h时表达效果最好。纯化后的蛋白条带与原重组菌位置一致均在40.0 kD处,证明重组蛋白得到良好纯化。试验确定抗原最佳包被浓度为12.85μg/m l,血清稀释度为1∶40。3次重复检测表明,变异系数最大为7.12%。[结论]建立的ELISA方法对检测PCV2感染具有良好的特异性及重复性。

关键词(KeyWords): 猪圆环病毒2型;原核表达;ELISA

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 吉林省牧业局项目(20040624);; 吉林农业大学博士启动基金资助项目

作者(Author): 高超;肖冲;高瑞峰;胡桂学;

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DOI: 10.13989/j.cnki.0517-6611.2010.32.173

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