安徽农业科学

2008, (23) 9905-9906

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鹦鹉热衣原体real-time quantitative PCR检测方法的研究
Study on the Detection Method of Chlamydophila Psittaci by Using Real-time Quantitative PCR

吴东海;李应国;杨迎伍;邓伟;王昱;李正国;

摘要(Abstract):

[目的]为鹦鹉热衣原体的快速、准确检测奠定基础。[方法]根据鹦鹉热衣原体主要外膜蛋白(MOMP)基因序列设计一对特异性引物,以SYBR GreenⅠ为荧光染料,建立了鹦鹉热衣原体Real-time quantitative PCR检测方法。根据检测结果,计算样品的批内和批间变异系数(CV)。[结果]以提取的鹦鹉热衣原体DNA为模板,用引物Cps-1和Cps-2进行PCR扩增,得到长100 bp的片段。扩增产物回收纯化后,连接到pGEM-T Easy载体上并转化到大肠杆菌DH5α,菌落PCR检测筛选阳性克隆,培养后提取质粒DNA。当模板浓度范围为1.78×102~1.78×108拷贝/μl时,标准曲线相关系数达0.998;批内和批间变异系数(CV%)分别为1.30%~4.59%和5.72%~9.87%。[结论]为鹦鹉热衣原体的感染、流行调查等提供了重要的技术参考。

关键词(KeyWords): 鹦鹉热衣原体;荧光实时定量PCR;外膜蛋白基因;检测

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 重庆市攻关项目(CSTC,2007AC1002)资助

作者(Author): 吴东海;李应国;杨迎伍;邓伟;王昱;李正国;

Email:

DOI: 10.13989/j.cnki.0517-6611.2008.23.121

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