安徽农业科学

2008, v.36(33) 14420-14421+14465

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松江鲈鱼ISSR-PCR反应体系的建立及优化研究
Establishment and Optimization of ISSR-PCR System in Trachidermus fasciatus Heckel

郁建锋;鲍峰;韩晓磊;徐建荣;

摘要(Abstract):

[目的]建立及优化松江鲈鱼ISSR-PCR的反应体系。[方法]采用ISSR-63引物,通过正交试验设计,分别对TaqDNA聚合酶、Mg2+d、NTPs和引物浓度等4种PCR原料进行优化,以确立松江鲈鱼的ISSR-PCR反应最佳体系,并通过温度梯度PCR,筛选适宜的退火温度。[结果]确定了松江鲈鱼的最适ISSR-PCR反应体系,20μl反应体系中含2.5 mmol/L Mg2+,250μmol/L dNTPs,0.25μmol/L引物,1.0UTaqDNA聚合酶,30 ng DNA模板及1×PCR buffer,确立退火温度为50.8℃。利用所建立的ISSR-PCR反应体系,通过对24份野生松江鲈鱼样本的检验,获得了清晰、重复性好、多态性高的DNA谱带。[结论]该研究为松江鲈鱼的遗传多样性分析及种质资源研究奠定了一定的基础。

关键词(KeyWords): 松江鲈鱼;正交试验;ISSR-PCR体系

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 江苏省科技厅农业高技术项目(BG2006337)

作者(Author): 郁建锋;鲍峰;韩晓磊;徐建荣;

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DOI: 10.13989/j.cnki.0517-6611.2008.33.137

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