安徽农业科学

2008, (29) 12616-12618

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鸡新城疫病毒F基因部分片段克隆表达及其抗体制备
Cloning and Expression of Partial F Gene Segement in Chicken Newcastle Disease Virus and Its Antibody Preparation

程宝艳;余为一;彭明义;程帮照;戴银;陈芳芳;

摘要(Abstract):

[目的]为进一步研究新城疫病毒的分子结构和基因疫苗奠定基础。[方法]用自行设计的l对引物,通过RT-PCR从接毒的SPF鸡胚的尿囊液中克隆了新城疫病毒F基因部分片段,将该基因片段插入含谷胱甘肽(GST)基因的质粒pGEX-4T-1,构建了重组质粒,对提取的融合蛋白进行亲和层析纯化和琼扩、ELISA及W estern-blot检测。[结果]通过克隆和PCR扩增获得新城疫病毒F基因的部分片段,大小为509 bp;对构建的重组质粒pGEX-4T-1-F509经诱导表达,获得分子大小约为44 000 bp的融合蛋白,其中F基因的部分片段大小约18 000 bp;经亲和层析,获得纯化GST-F509融合蛋白,进一步用该蛋白免疫小鼠,制备了鼠源抗鸡新城疫病毒F蛋白抗体。[结论]琼脂扩散试验、ELISA及W estern-blot检测表明,该融合蛋白中的F片段具有良好的抗原性。

关键词(KeyWords): 新城疫病毒;F基因;克隆;原核表达

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家自然资金项目(30671537)资助

作者(Author): 程宝艳;余为一;彭明义;程帮照;戴银;陈芳芳;

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DOI: 10.13989/j.cnki.0517-6611.2008.29.133

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