抑制素质粒的提取与纯化研究Study on Extraction and Purification of Inhibin Plasmid
杨维;石国庆;夏洁;张红琳;
摘要(Abstract)：
[目的]为抑制素质粒的大量提取与纯化寻找一种成本低的方法。[方法]采用碱裂解法与DEAE-纤维柱层析法提取与纯化抑制素质粒DNA,用分光光度法测定其浓度和纯度。[结果]抑制素质粒DNA的等电点为2.0～2.5,低于大部分蛋白质。pH值为8.0时,抑制素质粒DNA带负电荷,且电荷数量与RNA和蛋白质不同。用紫外分光光度计测定的柱层析后洗脱峰1、2、3在260和280 nm波长处的吸光度值分别为3.01和2.9、0.95和0.51、0.84和0.76,其OD260 nm/OD280 nm分别为1.04、1.86和1.10。3 mol/LNaCl的洗脱峰1大部分是蛋白质,0.6 mol/LNaCl的洗脱峰2是浓度为93.0 ng/ml的抑制素质粒DNA,3 mol/LNaCl的洗脱峰3是杂质。[结论]利用碱裂解法能从大肠杆菌细胞中分离出抑制素质粒DNA,DEAE-纤维柱层析法纯化的抑制素质粒DNA达到了要求的纯度。
关键词(KeyWords)： 质粒;提取;纯化;碱裂解法;DEAE-纤维柱层析
基金项目(Foundation): 江苏省教育厅自然科学研究基金(06KJD1801)
作者(Author): 杨维;石国庆;夏洁;张红琳;
Email:
DOI: 10.13989/j.cnki.0517-6611.2009.23.053
参考文献(References)：
- [1]FERREIRAN,MONTEIROGA,PRAZERES D M,et al.Downstreampro-cessing of plasmid DNA for gene therapy and DNA vaccine applications[J].Trends Biotechnol,2000,18(9):380-388.
- [2]PRATHERKJ,SAGARS,MURPHYJ,etal.Industrial scale production ofplasmid DNAforvaccine and gene therapy:plasmid design,production andpurification[J].Enzyme Microbial Technol,2003,33(19):865-883.
- [3]J.萨姆布鲁克、EF.弗里奇等.分子克隆实验指南[M].北京:科学出版社,2002:2.
- [4]杨建雄.生物化学与分子生物学实验技术教程[M].北京:科学出版社,2002:1.
- [5]汪家政.蛋白质技术手册[M].北京:科学出版社,2002:1.
- [6]刘文华,肖祥华,施产甫,等.pcDNA3-内皮抑素质粒的大规模纯化[J].南京军医学院学报,2003(3):148-150.
- [7]LEE S F,ANNP F,BLEIWEIS AS,et al.Molecular cloning and expres-sion of a Streptococcus mutans major surface protein antigen P1(Ⅰ/Ⅱ)inEscherichia coli[J].InfectImmun,1988,56(11):2114-2119.
- [8]SAMBROOKJ,FRITSCHE F,MANIATIS T.Molecular cloning:a labora-torymanual[M].NewYork:Cold SpringHarborLaboratoryPress,1989:21-40.