安徽农业科学

2009, v.37;No.281(28) 3521-3523

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双链RNA依赖的蛋白激酶(PKR)的真核表达、纯化及鉴定
Eukaryotic Expression,Purification and Identification of Double-stranded RNA-Dependent Protein Kinase(PKR)

关振宏;李影;张茂林;段铭;

摘要(Abstract):

[目的]获得真核表达的Flag-PKR融合蛋白,以用于流感病毒相关的PKR信号通路调控机制研究。[方法]以RT-PCR方法扩增PKR目的基因,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.0-Flag中。将所构建的重组质粒pcDNA3.0-Flag-PKR转染293T细胞,利用Flag抗体偶联的琼脂糖凝胶(anti-Flag M2-Agarose)纯化Flag-PKR融合蛋白,所得产物进行SDS-PAGE、Western blot及体外活性鉴定。[结果]重组质粒转染293T细胞,Western blot显示表达出的融合蛋白能够被抗Flag的抗体特异性识别,其相对分子量约为69 kDa,与Flag-PKR融合蛋白大小相符;体外磷酸化试验表明,Flag-PKR融合蛋白能够发生自动磷酸化。[结论]在293T细胞中表达、纯化了有活性的Flag-PKR融合蛋白,为PKR信号通路的研究奠定了基础。

关键词(KeyWords): 流感病毒;双链RNA依赖的蛋白激酶;真核表达;纯化

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家自然科学基金资助项目(30800824);; 吉林大学农学部引进人才启动基金项目(4305050102B9)

作者(Author): 关振宏;李影;张茂林;段铭;

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