致病性副溶血性弧菌特异性三重PCR检测方法研究Study on the Specific Triplex-PCR Method of Pathogenic Vibrio parahaemolyticus
金雷;陈瑜;张小军;施慧;
摘要(Abstract)：
[目的]建立同时检测致病性副溶血性弧菌gyrase、tdh、toxR基因的三重PCR快速检测方法。[方法]用3种基因的特异性引物分别对副溶血性弧菌ATCC33847的模板DNA进行单一扩增,找到各自引物最佳扩增条件;再用3种引物同步对模板DNA进行扩增,通过优化引物浓度、引物间比例以及退火温度,建立最佳扩增体系。[结果]在最佳三重PCR反应条件下,gyrase、tdh和toxR能同时扩增出清晰条带,大小分别为91、269和368 bp。[结论]该研究为致病性副溶血性弧菌的快速检测提供了一种新的技术方法。
关键词(KeyWords)： 致病性副溶血性弧菌;三重PCR;gyrase基因;tdh基因;toxR基因
基金项目(Foundation): 浙江省分析测试科技计划项目(2015C37065);; 浙江省自然科学基金项目(Y15C190018)
作者(Author): 金雷;陈瑜;张小军;施慧;
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DOI: 10.13989/j.cnki.0517-6611.2017.14.048
参考文献(References)：
- [1]石椿丽.从进境的海产品中检出副溶血性弧菌[J].福建畜牧兽医,2010,32(3):4-5.
- [2]何玉芳,裘伟康,郭智成,等.杭州市不同样品中副溶血性弧菌污染状况检测[J].中国公共卫生,2007,23(6):745-746.
- [3]YAMAZAKI W,ISHIBASHI M,KAWAHARA R,et al.Development of a loop-mediated isothermal amplification assay for sensitive and rapid detection of Vibrio parahaemolyticus[J].BMC Microbiology,2008,8(1):163.
- [4]李晓虹,闫东丽.利用多重PCR检测食品中副溶血性弧菌的方法研究[J].中国卫生检验杂志,2007,17(11):1975-1977.
- [5]JONES J L,VICKERY M C,BLACKSTONE G M,et al.Development of a multiplex real-time PCR assay with an internal amplication control for the detection of total and pathogenic Vibrio parahaemolyticus bacteria in oystera[J].Applied and environmental microbiology,2007,73(18):5840-5847.
- [6]CAI T X,JIANG L Y,YANG C B,et al.Application of real-time PCR for quantitative detection of Vibrio parahaemolyticus from seafood in eastern China[J].FEMS Immunology and Medical Microbiology,2006,46(2):180-186.
- [7]中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会.食品微生物学检测副溶血性弧菌检验:GB/T 4789.7—2013[S].北京:中国标准出版社,2013.
- [8]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局,中国国家标准化管理委员会.饲料中副溶血性弧菌的检测:GB/T 26426—2010[S].北京:中国标准出版社,2010.
- [9]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局.进出口食品中副溶血性弧菌检测方法:SN/T 0173—2010[S].北京:中国标准出版社,2010.
- [10]黄晨阳,于龙,兰智杰,等.基于toxR基因的PCR检测副溶血性弧菌的方法建立[J].河南预防医学杂志,2013,24(5):327-330.
- [11]岳友宏,苏良.双重PCR检测副溶血性弧菌的tlh和tdh基因方法建立与初步应用[J].实用预防医学,2012,19(9):1413-1415.
- [12]陈丽萍,刘忠民,陈芸,等.特异性三重PCR快速检测副溶血性弧菌[J].微生物学通报,2014,41(4):764-775.
- [13]黄晓蓉,吕海沧,郑晶,等.副溶血弧菌的多重PCR检测[J].食品科学,2006,27(10):445-446.
- [14]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局.进出口食品中副溶血性弧菌快速及鉴定检测方法实时荧光PCR方法:SN/T 2424—2010[S].北京:中国标准出版社,2010.
- [15]FDA.Bacteriological analytical manual online chapter 9[S].Seventh Edition.American:Food and Drug Administration,2004.
- [16]KIM Y B,OKUDA J,MATSUMOTO C,et al.Identification of Vibrio parahaemolyticus strains at the species level by PCR targeted to the toxR gene[J].Journal of clinical microbiology,1999,37(4):1173-1177.