双宝;李明;李慧;张宁;王晴;高继国;刘忠华;

• 1:东北农业大学生命科学学院
• 2:东北农业大学司法鉴定中心

摘要(Abstract)：

[目的]探索获得大量高纯度重组人瘦素的方法。[方法]通过5 L发酵罐对重组人瘦素大肠杆菌pET32a-OB[BL21(DE3)]进行了高密度发酵,并通过DEAE sepharose Fast Flow阴离子层析分离将IPTG诱导表达的人瘦素进行纯化,并通过ESI-Q-TOF-MS/MS分析验证目的蛋白。[结果]得到的培养物为3 L左右,OD600为20.25,纯化后的人瘦素纯度为98%左右。[结论]发酵罐发酵得到的菌体密度要远大于正常用三角瓶培养的菌体密度,阴离子交换层析法制备重组人瘦素符合大量生产高纯度重组人瘦素的要求。

关键词(KeyWords)： 瘦素;高密度发酵;蛋白质纯化

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家自然科学基金面上项目(30871431)

作者(Author): 双宝;李明;李慧;张宁;王晴;高继国;刘忠华;

Email:

DOI: 10.13989/j.cnki.0517-6611.2011.27.049

参考文献(References)：

• [1]付莉,叶本兰.瘦素与慢性肾功能衰竭[J].临床和实践医学杂志,2008,7(1):158-159.
• [2]李玉成.ATGL在Leptin介导脂解过程中的表达调控及其机理研究[D].杨凌:西北农林科技大学,2008:8.
• [3]胡建忠,王子朴.瘦素(Leptin)的生理作用机制及长期运动对其水平的影响[J].上海体育学院学报,2008,32(5):41-43.
• [4]孟扬.瘦素与儿童肥胖研究进展[J].医学研究生学报,2008,21(11):1211-1213.
• [5]王希龙,梁华平,张连阳.创伤后瘦素及其受体的变化及临床意义研究[J].解放军医学杂志,2008,33(12):1410-1412.
• [6]林季,颜光涛.Leptin在大鼠肝缺血/再灌注介导的肠道损伤中的作用[J].世界华人消化杂志,2008,16(31):3485-3490.
• [7]刘新武.中国荷斯坦奶牛DGAT2、Leptin基因多态性与产奶性状关系研究[D].杨凌:西北农林科技大学,2008:1-2.
• [8]喻妍,赵靖平,吴仁容.瘦素基因-2548G/A多态性与抗精神病药物所致体重增加的关联分析[J].中国神经精神疾病杂志,2008,34(10):616-617.
• [9]PALOU A,PICO C.Leptin intake during lactation prevents obesity and af-fects food intake and food preferences in later life[J].Appetite,2009,52:249-252.
• [10]SHUTAKEDA.Osteoporosis:A neuroskeletal disease?[J].The Interna-tional Journal of Biochemistry and Cell Biology,2009,41:455-459.
• [11]杨海英,董俊华,王明月,等.生长激素缺乏症儿童血清瘦素、骨钙素水平变化及其相关性分析[J].中国现代医生,2008,46(24):9-10.
• [12]双宝,李明,李成,等.人痩素基因的克隆及原核表达[J].东北农业大学学报,2010,41(4):67-69
• [13]FAWZI A B,ZHANG H,Van HEEK M,et al.Purification of milligramquantities of human leptin from recombinant E.coli[J].Horm Metab Res,1996,28:694-697.
• [14]许婉宁,丁宗一,杜丽蓉,等.重组人类肥胖抑素在大肠杆菌中的大规模纯化[J].中华儿科杂志,2006,38(6):365-368.