安徽农业科学

2012, v.40;No.377(16) 8845-8849

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柑橘转基因成分多重PCR检测体系的建立
Establishment of a Multiplex PCR System for Detecting Transgenic Ingredients from Citrus

李政利;彭爱红;邹修平;何永睿;姚利晓;陈善春;

摘要(Abstract):

[目的]建立柑橘转基因成分的多重PCR检测体系。[方法]根据GenBank中pBI121质粒序列和柑橘(Citrus.)Actin基因序列,分别设计CaMV35S启动子、NOS启动子、NOS终止子特异引物和Actin基因的特异引物,建立能同时检测出4种序列的多重PCR检测体系,同时通过正交试验确定该体系的最佳引物浓度和比例及PCR反应体系中各因素的浓度及反应程序,并对该方法的灵敏度进行验证。[结果]试验得到的最佳MPCR反应体系为:10×buffer 2.5μl,25 mmol/L MgCl22.0μl;dNTP Mixture(2.5 mmol/L each)2.0μl,10μmol/L的Actin基因、35S启动子、NOS启动子、NOS终止子引物分别加入1.0、1.0、1.5、0.5μl,模板DNA 0.1μg,Taq DNA聚合酶1.25U,加ddH2O至25μl。PCR反应程序为:94℃预变性5 min;94℃30 s,64.1℃45 s,72℃50 s,31个循环;72℃10 min。试验中,经正交优化后的4重PCR反应灵敏度达0.1%。[结论]该研究建立的MPCR检测体系,理论上已能满足柑橘或其深加工产品的转基因成分检测。

关键词(KeyWords): 多重PCR;正交试验;检测;转基因成分

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 重庆市重点实验室专项(CSTC);; “863”科技部农村领域国家科技计划课题(2011AA100205);; 农业部/公益性行业(农业)科研专项(201003067);; 教育部科学技术研究重点项目(109131)

作者(Author): 李政利;彭爱红;邹修平;何永睿;姚利晓;陈善春;

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参考文献(References):

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