安徽农业科学

2009, v.37;No.272(19) 8898-8900

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瘤胃甲烷生成菌PCR反应条件的优化
Optimization on the PCR Reaction Condition of Methane Producing Bacteria in Rumen

淡瑞芳;藏丽丽;龙瑞军;魏小红;张海涛;

摘要(Abstract):

[目的]优化适合于瘤胃甲烷生成菌的PCR反应体系。[方法]以1.5周岁健康的藏系绵羯羊瘤胃内容物总DNA为模板,用特异性引物对甲烷生成菌16SrDNA保守序列进行PCR扩增,并通过改变PCR反应体系中的各参数,优化其PCR反应体系中的相关参数。[结果]PCR最优程序为:94℃预变性3 min;94℃变性45 s,51℃退火45 s,72℃延伸90 s,35个循环;72℃后延伸7 min。优化后的PCR反应体系为:5.00μl缓冲液,4.00μl d-NTP,2.00μl引物(前引物和后引物各1.00μl),4.00μl MgCl2,0.25μlTaqDNA聚合酶和1.00μl 1∶100倍稀释的DNA模板,然后加水补足25.00μl。[结论]该研究为瘤胃甲烷生成菌功能的研究奠定了基础。

关键词(KeyWords): 甲烷生成菌;16SrDNA;PCR反应条件;优化

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家自然科学基金重点项目(30730069)

作者(Author): 淡瑞芳;藏丽丽;龙瑞军;魏小红;张海涛;

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