安徽农业科学

2016, v.44;No.514(09) 171-173+176

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利用重组枯草芽孢杆菌生产γ-氨基丁酸的研究
Study on Utilizing a Recombinant B.subtilis 168/pHT01-gadA-pdxH for Synthesis of γ-aminobutyric Acid

张六六;毛连山;

摘要(Abstract):

[目的]构建一株高产L-谷氨酸脱羧酶的重组枯芽孢杆菌B.subtilis 168/p HT01-gad A-pdx H。[方法]以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)为宿主细胞,将大肠杆菌脱羧酶基因(gad A)与其辅酶磷酸吡哆醛的再生基因(pdx H)在质粒p HT01上串联表达,构建一株高产L-谷氨酸脱羧酶的重组枯草芽孢杆菌B.subtilis 168/p HT01-gad A-pdx H。[结果]带有pdx H基因的重组菌B.subtilis 168/p HT01-gad A-pdx H催化谷氨酸生成γ-氨基丁酸(GABA)的效率明显高于B.subtilis 168/p HT01-gad A。催化反应24 h时,生成的GABA浓度达252 g/L,较对照菌株提高了61 g/L。进一步对重组菌B.subtilis 168/p HT01-gad A-pdx H全细胞转化谷氨酸生成GABA的条件进行了优化,其最优条件:转化缓冲液为p H 5.0的0.1 mol/L Tris-HCl,转化温度40℃,激活剂为5 mmol/L Ca~(2+)与5 mmol/L Mg~(2+)。在上述最优条件下,催化24 h生成的GABA浓度达327 g/L。[结论]所获得的重组菌转化效率较高,具有一定的工业化应用前景。

关键词(KeyWords): 枯草芽孢杆菌;L-谷氨酸脱羧酶;磷酸吡哆醛的再生;L-谷氨酸;γ-氨基丁酸

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 江苏省科技支撑项目(BE2013670)

作者(Author): 张六六;毛连山;

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