罗翠平;李金华;谢烨明;曾万勇;

• 1:武汉工业学院

摘要(Abstract)：

[目的]对cry基因保守序列进行克隆,并使其在大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行表达。[方法]根据NCBI数据库信息设计引物序列,采用PCR技术从抗虫棉基因组DNA中扩增出抗虫基因cry的保守序列,构建重组载体并转化到大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株中,利用pGEX原核表达系统诱导蛋白表达。同时,分析了不同IPTG浓度及不同诱导时间对蛋白表达量的影响。[结果]扩增出抗虫基因cry的两段保守序列,长度分别为304和853 bp;SDS-PAGE检测结果显示,经IPTG诱导后重组质粒pGEX-4t-1-304和pGEX-4t-1-853成功地表达了大量GST融合蛋白,分子量分别为39和62.4 kDa,与预期结果一致;确定了IPTG最佳诱导浓度为0.15 mmol/L,最佳诱导时间为7h。[结论]为今后检测转Bt基因农作物奠定了基础。

关键词(KeyWords)： Bt基因;保守序列;克隆;原核表达

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 武汉工业学院博士科研启动基金(2006696)

作者(Author): 罗翠平;李金华;谢烨明;曾万勇;

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DOI: 10.13989/j.cnki.0517-6611.2012.02.005

参考文献(References)：

• [1]李海燕,朱延明,马凤鸣.植物抗虫基因工程的研究进展[J].东北农业大学学报,2000,31(4):399-405.
• [2]Van RIE J,MCGAUGHEY W H,JOHNSON D E.Mechanism of Insect Re-sistance to the Micro Bial Insect Bacillusthuringiensis[J].Science,1990,247:72-74.
• [3]袁胜亮,李明,周国娜,等.浅析抗虫基因种类及抗虫原理[J].安徽农业科学,2007,35(31):9963-9964.
• [4]于德花,刘玉新,张明兴.利用转基因技术进行作物遗传改良的研究进展[J].安徽农业科学,2007,35(11):3167-3168,3171.
• [5]ROH J Y,CHOI J Y,LI M S,et al.Bacillus thuringiensis as a specific,safeand effective tool for insect pest control[J].J Microbiol Biotechnol,2007,7(4):547-559.
• [6]PANADDA B.Crystal structure of the mosquito-larvicidal toxin cry4Ba andits biological implications[J].J Mol Biol,2005,348:363-382.
• [7]韩蓓,袁志明,陈士云.苏云金芽孢杆菌cry1Aa核心毒素基因转化烟草及其杀虫活性[J].高科技通讯,2005,15(9):62-66.
• [8]J.萨姆布鲁克,E.F.弗里奇,T.曼尼阿蒂斯.分子克隆实验指南[M]黄培堂,等,译.3版.北京:科学出版社,2002.
• [9]卢军,刘春字,刘晓青,等.大肠杆菌生产重组人bFGF的发酵条件[J].暨南大学学报:自然科学版,1997,18(3):95-99.