安徽农业科学

2012, v.40;No.363(02) 648-651

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cry基因保守序列克隆及其在大肠杆菌Rosetta(DE3)中的表达
Cloning and Expression of Conserved Sequences of cry-type Gene in Rosetta(DE3)

罗翠平;李金华;谢烨明;曾万勇;

摘要(Abstract):

[目的]对cry基因保守序列进行克隆,并使其在大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行表达。[方法]根据NCBI数据库信息设计引物序列,采用PCR技术从抗虫棉基因组DNA中扩增出抗虫基因cry的保守序列,构建重组载体并转化到大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株中,利用pGEX原核表达系统诱导蛋白表达。同时,分析了不同IPTG浓度及不同诱导时间对蛋白表达量的影响。[结果]扩增出抗虫基因cry的两段保守序列,长度分别为304和853 bp;SDS-PAGE检测结果显示,经IPTG诱导后重组质粒pGEX-4t-1-304和pGEX-4t-1-853成功地表达了大量GST融合蛋白,分子量分别为39和62.4 kDa,与预期结果一致;确定了IPTG最佳诱导浓度为0.15 mmol/L,最佳诱导时间为7h。[结论]为今后检测转Bt基因农作物奠定了基础。

关键词(KeyWords): Bt基因;保守序列;克隆;原核表达

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 武汉工业学院博士科研启动基金(2006696)

作者(Author): 罗翠平;李金华;谢烨明;曾万勇;

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