珍稀濒危植物大果木莲ISSR-PCR反应体系的建立Establishment of ISSR-PCR Reaction System for the Rare and Endangered Plant Manglietia grandis Hu et Cheng
毛云玲;陈少瑜;韩燕;吴涛;司马永康;郝佳波;付玉嫔;
摘要(Abstract):
[目的]建立高效稳定的大果木莲ISSR-PCR反应体系。[方法]以珍稀濒危植物大果木莲新鲜嫩叶为材料,在高盐沉淀法提取高质量基因组DNA的基础上,通过ISSR-PCR反应体系中5个主要因素的单因子梯度试验,优化并最终建立了大果木莲稳定而高效的ISSR-PCR反应体系和反应程序。[结果]试验建立的大果木莲的ISSR-PCR反应体系为:20.0μl反应体系中含10×buffer2.0μl、Mg2+2.0 mmol/L、Taq酶0.5 U、DNA模板40 ng、引物0.8μmol/L、dNTPs0.2 mmol/L和ddH2O13.3μl,其反应程序为:94℃预变性5 min;94℃变性1 min,50~60℃退火45 s,72℃延伸2 min,40个循环;72℃完全延伸7 min。[结论]该研究为进一步揭示大果木莲群体的遗传多样性和遗传结构状况以及制定科学的保护措施提供了理论依据。
关键词(KeyWords): 珍稀濒危植物;大果木莲;基因组DNA;ISSR-PCR反应体系
基金项目(Foundation): 云南省自然科学基金项目(2006C0066M)
作者(Author): 毛云玲;陈少瑜;韩燕;吴涛;司马永康;郝佳波;付玉嫔;
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DOI: 10.13989/j.cnki.0517-6611.2009.31.141
参考文献(References):
- [1]云南省林业厅,云南省林业科学院,国家林业局云南珍稀濒特森林植物保护和繁育重点实验室.云南国家重点保护野生植物[M].昆明:云南科技出版社,2005.
- [2]姜静,杨传平,刘桂丰,等.桦树ISSR-PCR反应体系的优化[J].生态学杂志,2003,22(3):91-93.
- [3]傅立国.中国植物红皮书——稀有濒危植物(第1册)[M].北京:科学出版社,1992.
- [4]傅立国,陈潭清,郎楷永,等.中国高等植物[M].青岛:青岛出版社,2001.
- [5]ZIETKIEWICZ E,RAFALSKI A,LABUDA D.Genome fingerprinting bysimple sequence repeat(SSR)anchored polymerase chain reaction ampli-fication[J].Genomics,1994,20:176-183.
- [6]WOLFF K,ZIETKIEWICZ E,HOFSTRA H.Identification of chrysanthe-mumcultivars and stability of DNA fingerprint patterns[J].Theoreticaland Applied Genetics,1995,91:439-447.
- [7]王建波.ISSR分子标记及其在植物遗传学研究中的应用[J].遗传,2002,24(5):613-616.
- [8]谢佳燕,张知彬.ISSR标记技术及其在遗传多样性研究中的应用[J].兽类学报,2004,24(1):71-77.
- [9]孙洪,程静,詹克慧,等.ISSR标记技术及其在作物遗传育种中的应用[J].分子植物育种,2005,3(1):123-127.
- [10]周延清.DNA分子标记技术在植物研究中的应用[M].北京:化学工业出版社,2005.
- [11]曹国艳,陈少瑜,司马永康,等.金叶含笑叶片基因组DNA提取方法的比较[J].林业调查规划,2008,33(5):33-35.
- [12]曹国艳.木兰科含笑属与相关属的ISSR系统发育分析[D].昆明:西南林学院,2009.
- [13]林万明.PCR技术操作和应用指南[M].北京:人民军医出版社,1993.
- [14]尹佟明,韩正敏,黄敏仁,等.林木RAPD分析及试验条件的优化[J].南京林业大学学报,1999,23(4):7-12.
- [15]朱为民,王曙霞,杨少军,等.番茄ISSR-PCR反应体系的优化[J].上海农业学报,2007,23(3):5-8.
- [16]GEXJ,SUNM.Reproductive biologyand genetic diversityof a Cryptovi-viparous mangroveAegiceras corniculatum(Myrtinaceae)using allozymeand inter-simple sequence repeat(ISSR)analysis[J].MolecularEcology,1999,8:2061-2069.
- [17]贾文杰,李恩香,杨柏云,等.白木香基因组DNA的提取及ISSR反应条件的优化[J].安徽农业科学,2008,36(24):10365-10367,10370.
- [18]赵杨,王秀荣,何可权,等.贵州石笔木DNA提取与ISSR-PCR反应体系的建立[J].安徽农业科学,2008,36(29):12607-12610.
- [19]柴素芬,陈兆贵,洪彩霞.芸香科药用植物ISSR-PCR反应体系的建立及优化[J].安徽农业科学,2008,36(33):14433-14435,14512.
- [20]马丽娅,孙小琴,贾文杰,等.春兰ISSR-PCR反应体系的建立和优化[J].安徽农业科学,2008,36(34):14912-14914.
- [21]黎海利,董丽,谭飞理.萱草ISSR-PCR最佳反应体系的建立[J].安徽农业科学,2008,36(12):4884-4885.
- [22]周丽,胡春根.送春与多花兰杂种ISSR-PCR反应体系的建立与优化[J].安徽农业科学,2009,37(17):7904-7906.