高产纤维素酶绿色木霉基因工程菌的构建Construction of Genetic Engineering Bacteria of Trichoderma viride with High Cellulose
胡耀辉;闫舟;于寒松;
摘要(Abstract)：
[目的]构建CBHⅡ基因过量表达的绿色木霉工程菌。[方法]根据绿色木霉cDNA序列设计合成引物,PCR扩增CBHⅡ基因序列,将完整的目的基因与表达载体pCAMBIA1302连接,转入大肠杆菌DH5α中,获得重组质粒pCAMBIA1302-CBHⅠ。再将pCAM-BIA1302-CBHⅠ重组质粒与瑞氏木霉外切葡聚糖纤维二糖水解酶Ⅱ(CBHⅡ)PcbhⅡ启动子片段连接,将潮霉素磷酸转移酶(hyg)基因片段插入PcbhⅡ启动子下游,转入大肠杆菌DH5α中,获得重组表达质粒pCAMBIA1302-CBHⅡ。[结果]构建的重组表达质粒电转化后经SDS-PAGE电泳检测,绿色木霉纤维素酶CBHII基因在原宿主菌中成功过量表达,证实CBHⅡ基因在PcbhⅡ启动子控制下进行高效表达。[结论]为高产纤维素酶系的工业化菌株构建奠定基础。
关键词(KeyWords)： 绿色木霉;CBHⅡ基因;瑞氏木霉启动子;外源基因表达系统
基金项目(Foundation): 吉林省科技厅重点攻关项目
作者(Author): 胡耀辉;闫舟;于寒松;
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DOI: 10.13989/j.cnki.0517-6611.2010.25.045
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