安徽农业科学

2009, v.37(04) 1483-1486+1501

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极端嗜热菌Pyrococcus furiosus热休克蛋白HSP60的克隆表达和纯化
Cloning Expression and Purification of Heat Shock Protein HSP60 from Hyperthermophilic Archaeon Pyrococcus furiosus

陈华友;张志燕;吴岩;张毅;

摘要(Abstract):

[目的]研究极端嗜热菌Pyrococcus furiosus的热休克蛋白HSP60(Pfu-HSP60)的克隆表达与纯化方法。[方法]应用加拿大HSP60数据库及其BLAST和FASTA序列比较工具对Pfu-HSP60基因序列进行同源性分析,对HSP60基因进行了体外扩增并在大肠杆菌中成功克隆与表达,还进行了Pfu-HSP60蛋白的纯化。[结果]以Taq酶为DNA聚合酶,用PCR方法扩增出预期的Pfu-HSP60基因,插入质粒pET-21a,转化入大肠杆菌受体菌BL21-Codonplus(DE)3-RIL,0.1mmol/LIPTG诱导2 h,得到可溶性高表达,经超声、离心、上清85℃加热、再离心得到初步纯化的Pfu-HSP60蛋白,再经DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析纯化,收集峰超滤浓缩后经SephacrylS-200凝胶过滤柱,收集Pfu-HSP60蛋白峰,结果获得纯度为94.5%以上的重组Pfu-HSP60蛋白,总得率为28.0%。[结论]该研究为Pfu-HSP60蛋白的结构和功能及其他热休克蛋白相互作用机制等的研究奠定基础。

关键词(KeyWords): 热休克蛋白;Pyrococcus furiosus;纯化;极端嗜热菌

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家基础研究973计划(2004CB719606);; 江苏大学校基金资助项目(08jdg011)资助

作者(Author): 陈华友;张志燕;吴岩;张毅;

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