安徽农业科学

2009, v.37;No.v.37(26) 12414-12417

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GST-Dot4融合蛋白的表达·纯化及鉴定
Expression,Purification and Identification of GST-Dot4 Fusion Protein

张艳梅;丛文娟;郭建军;刘中来;

摘要(Abstract):

[目的]为了提高Dot4蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达并获得较高纯度的蛋白。[方法]以pGEX-KG-Dot4重组质粒转化E.coliBL21后,用IPTG诱导重组菌表达GST-Dot4融合蛋白,采用SDS-PAGE及W estern B lot法鉴定表达产物,用G lutathione Sepharose4B亲和层析柱分离纯化。[结果]pGEX-KG-Dot4重组表达载体在大肠杆菌中获得高效表达;经G lutathione Sepharose4B亲和层析柱纯化获得了高纯度的Dot4融合蛋白;W estern B lot表明,该蛋白可与GST标签抗体反应,表明获得了目的蛋白。[结论]在大肠杆菌中表达纯化后得到较高纯度的GST-Dot4融合蛋白,为Dot4蛋白的结构、功能及作用机制研究奠定了基础。

关键词(KeyWords): 融合蛋白;可溶性表达;蛋白纯化

Abstract:

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基金项目(Foundation):

作者(Author): 张艳梅;丛文娟;郭建军;刘中来;

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