安徽农业科学

2008, (20) 8489-8491

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木豆随机扩增多态性DNA的反应体系研究
Study on the Reaction System of Randomly Amplified Polymorphic DNA in Pigeonpea

蒋慧萍;李杨瑞;

摘要(Abstract):

[目的]分析影响木豆RAPD-PCR反应中的主要因素,优化反应条件。[方法]以木豆品种ICPL87091为试材,以木豆基因组DNA为模板,通过对PCR反应体系中各种参数的优化设置,分析比较各种因素对RAPD扩增结果的影响,建立适宜的反应体系。[结果]试验得到了较为理想的适宜木豆的反应体系。优化的木豆RAPD反应条件为:模板DNA浓度30 ng,随机引物1.6μmol/L,dNTPs(dATP,dCTP,dGTP,dTTP)各0.2 mmol/L,Mg2+浓度2.0 mmol/L,Taq酶1.0 U,反应体积为25μl。循环体系为:先94℃1 min,35℃2 min,72℃2 min,5个循环;然后94℃30 s,37℃1 min,72℃1 min,35个循环;最后72℃延伸10 min。[结论]利用这一反应体系可有效地进行木豆随机扩增多态性DNA分析,极大地提高了实验结果的可重复性。

关键词(KeyWords): 木豆;随机扩增多态性DNA;分子标记;反应体系

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 广西农科院院科技发展基金(2002003)资助

作者(Author): 蒋慧萍;李杨瑞;

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