马铃薯3种病毒的多重PCR检测方法构建Establishment of Multiplex PCR for Three Vrius of Potato
乔楠;曹佳;李霞;
摘要(Abstract)：
[目的]构建马铃薯A病毒(Potato virus A,PVA)、烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)、马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)3种马铃薯主要易受感染的病毒多重PRC(multiplex PCR)检测方法。[方法]根据GenBank公布的PVA、TMV、PVY基因序列分别设计引物,建立3种马铃薯病毒的多重PCR方法;通过构建3种病毒PCR扩增目的基因的质粒用于制备标准品进行敏感性验证,利用PVX(Potato virus X)、PVM(Potato virus M)、PVS(Potato virus S)、PVV(Potato virus V),CMV(Cucumber mosaic virus)等其他马铃薯病毒进行特异性试验;并对11份疑似发生病毒病的马铃薯块茎采集样品进行了检测。[结果]研究中构建的马铃薯3种病毒多重PCR检测方法,最低检测下限:PVA为100 copies/2μl,PVY为100 copies/2μl,TMV为1 000 copies/2μl,与PVX、PVM、PVV、PVS、CMV等其他马铃薯病毒无交叉反应,具有良好的特异性;11份疑似发生病毒病的马铃薯块茎中7份样品检出3种病毒感染阳性。[结论]该研究成功构建了马铃薯PVA、TMV、PVY病毒的多重PCR方法,为马铃薯病毒检测技术应用奠定一定基础。
关键词(KeyWords)： 马铃薯;PVA;TMV;PVY;多重PCR
基金项目(Foundation):
作者(Author): 乔楠;曹佳;李霞;
Email:
DOI: 10.13989/j.cnki.0517-6611.2011.25.166
参考文献(References)：
- [1]段绍光,金黎平,谢开云,等.分子标记及其在马铃薯遗传育种中的应用[J].种子,2003(5):100-103.
- [2]魏延安.对推进陕西马铃薯产业发展的几点思考[J].中国马铃薯,2006,20(1):60-62.
- [3]袁东征,王帆.早春马铃薯无公害栽培的几项关键技术[J].农业知识,2008(1):4-5.
- [4]陆广欣,毛碧增.生物技术在马铃薯产业中的应用及其研究进展[J].浙江农业科学,2011,(2):243-246,249.
- [5]杨荣香,杨成祥,尤贵如.浅谈无公害马铃薯病虫害综合防治技术[J].经济师,2011(3):275.
- [6]DING H B,TIAN X Q,DENG K P,et al.Selection of Drugs and Applica-tionMethods forTreating Seed Potato[J].Guizhou Agricultural Sciences,2010,38(7):40-42.
- [7]王连根,袁东征,孟昭强.马铃薯栽培中的几项改进措施[J].农业知识,2009(1):14-15.
- [8]袁东征,王帆.马铃薯无公害栽培的几项改进措施[J].西北园艺,2007(3):45.
- [9]YANG X Q,XIANG B C,SHI L.Advances of Study on Potato VirusesElim ination Techniques[J].Anhui Agricultural Science Bulletin,2007,13(8):98-100.
- [10]李谋智.马铃薯产业必须重视种薯生产[J].甘肃农业,2003(10):48-49.
- [11]何建国,刘浩,徐迎菊,等.论宁夏马铃薯产业发展的技术对策[J].甘肃科技,2011,27(3):1-5.
- [12]黄元勋,田发端,赵迎春,等.论马铃薯营养成分及其品质改良[J].恩施职业技术学院学报:综合版,2002,14(3):77-83.
- [13]SONG J X,FAN S J,DENG K P,et al.Application ofMolecularMarkTechnology in Potato Breeding[J].Guizhou Agricultural Sciences,2006,34(5):72-75.
- [14]MA H,XIE X L,YIN J,et al.DuplexRT-PCR Detection ofPotato spindletuber viroid with an Internal Control ofPotatoND2 mRNA[J].ActaHor-ticulturae Sinica,2007,34(5):1213-1216.
- [15]YANW Z,PU Z G,ZHONG T T.Establishment of Sichuan Potato VirusDetection by RT-PCR[J].Southwest China Jouinal of Agricultural Sci-ences,2010,23(6):2171-2173.
- [16]DONG D X,ZHANG X L,LUO M,et al.Development of one-step multi-plex RT-PCR for simultaneous detection of four potato viruses[J].M icro-biology China,2011,38(1):131-137.