安徽农业科学

2012, v.40;No.377(16) 8932-8934

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牛轮状病毒结构蛋白VP4基因的真核表达
Eukaryotic Expression of Bovine Rotavirus Structural Protein VP4 Gene

王丹;宋玲玲;王洪梅;杨宏军;王立群;何洪彬;

摘要(Abstract):

[目的]克隆获得牛轮状病毒VP4全基因,并进行真核表达。[方法]采用RT-PCR技术,从牛轮状病毒总RNA中扩增出VP4基因,将其重组到含有Flag标签的pcDNA3.1(+)载体中,经PCR、酶切和测序鉴定正确后,通过Lipofect2000TM转染293T细胞,细胞增殖后经RT-PCR和Western Blot检测VP4基因的表达。[结果]获得了VP4基因的阳性重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-VP4;转染293T细胞后经RT-PCR和Western Blot检测表明,该基因的重组表达载体构建正确,可在293T细胞内瞬时表达。[结论]VP4基因的重组真核表达载体构建成功并可在真核表达细胞内表达,该研究为VP4基因的DNA疫苗的研发及应用奠定了基础。

关键词(KeyWords): 牛轮状病毒;VP4;基因克隆;真核表达

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家自然科学基金项目(31072160);; 国家转基因重大专项(2009ZX08007-006B);; 济南市高校院所自主创新计划项目(201004027,201102034);; BRV强毒株的致弱研究项目(Y2009-D56)

作者(Author): 王丹;宋玲玲;王洪梅;杨宏军;王立群;何洪彬;

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参考文献(References):

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