安徽农业科学

2010, v.38;No.312(23) 12891-12894+12897

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用于DNA转染的PRRSV全长感染性cDNA克隆改建及应用
Development of An Improved DNA-launched Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus Reverse Genetics System

刘长龙;李燕华;袁世山;

摘要(Abstract):

[目的]利用核酶自我剪切功能使PRRSV的基因组获得1个精确的基因组3′末端,提高全长感染性cDNA克隆的病毒拯救效率。[方法]用3步PCR方法将获得含有丁型肝炎病毒核酶序列的片段并将其克隆到PRRSV全长cDNA克隆pAPRRS的poly(A)下游,再通过酶切,连接将牛生长激素多聚腺甘酸转录终止序列插入到核酶序列后,构建成全长感染性cDNA克隆pAPRRS-HB,新构建的克隆转染MARC-145细胞,72h后用间接免疫荧光检测病毒N蛋白和非结构蛋白2(nsp2)的表达,并检测细胞上清中病毒的滴度。[结果]成功构建了含有核酶序列的PRRSV基因组全长感染性cDNA克隆pAPRRS-HB。新构建的全长感染性cDNA克隆能够较好地拯救出病毒,拯救效率比pAPRRS提高10倍左右。[结论]该结果为研究PRRSV基因结构与功能奠定了基础。

关键词(KeyWords): 猪繁殖与呼吸综合征病毒;全长感染性cDNA克隆;HDV核酶;DNA转染

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): “十一五”支撑项目课题(2006BAD06A01)

作者(Author): 刘长龙;李燕华;袁世山;

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参考文献(References):

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