安徽农业科学

2007, (23) 7117-7118+7121

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PCV2·ORF2基因片段在大肠杆菌中的表达与纯化
Expression and Purification of ORF2 Gene Fragment of Porcine Circovirus Type 2 in E. coli

王宪文;谢青梅;曹永长;于康震;毕英佐;

摘要(Abstract):

[目的]为了研究PCV2-ORF2基因片段在大肠杆菌中的表达与纯化。[方法]用PCR方法扩增PCV2 ORF2基因3′端片段,PCR产物经酶切后与经同样处理过的pET32a质粒连接,构建重组质粒。重组质粒经PCR和酶切鉴定并测序后,转化BL21感受态细胞;重组菌液用IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析。[结果]ORF2基因在大肠杆菌中正确表达,表达的融合蛋白的分子量约为33 ku;在37℃、1 mmol/L浓度下,诱导时间为6 h时表达量最大,占细菌总蛋白的23.62%。表达产物主要以包涵体的形式存在,将包涵体溶解后过Ni-NTA柱纯化可得到较为纯净的目的蛋白。[结论]该研究为猪断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)和猪皮炎和肾病综合征(PDNS)等疾病的防治奠定了基础。

关键词(KeyWords): 猪圆环病毒Ⅱ型;ORF2;表达

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作者(Author): 王宪文;谢青梅;曹永长;于康震;毕英佐;

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