安徽农业科学

2008, (08) 3155-3156

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连接方法对重组效率影响的比较研究
Comparative Study on the Effects of Connection Methods on the Recombination Efficiency

莫宁萍;岳昌武;刘坤祥;凌锌;

摘要(Abstract):

[目的]为探索一种适于连接PCR产物和不同粘端的新方法。[方法]分别采用冻融法、割胶法、试剂盒法和牙签法连接PCR产物与质粒DNA以及酶切产物与质粒DNA,比较不同连接方法对重组效率的影响。[结果]采用冻融法和割胶法连接PCR产物与pMD18-T,其连接效率分别为94.00%和93.00%,略高于试剂盒法和牙签法。采用冻融法和割胶法连接酶切产物的重组效率分别为86.67%和88.00%,略高于试剂盒法和牙签法。牙签法简化了连接前DNA相关操作,具有较高的连接效率,完全能够满足普通连接反应,特别是粘端连接反应要求。[结论]割胶法具有很高的重组效率和转化效率,可以满足普通连接反应、文库构建对连接效率和转化效率的要求,具有一定的应用前景。

关键词(KeyWords): 重组效率;转化;分子克隆;体外连接

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation):

作者(Author): 莫宁萍;岳昌武;刘坤祥;凌锌;

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