安徽农业科学

2007, (27) 8443+8446

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大肠杆菌原核表达载体pSBET-His的构建
Study on the Construction of Prokaryotic Expression Vector pSBET-His in E.coli

陈正斌;谭仲夏;秦西云;

摘要(Abstract):

为了构建原核表达载体pSBET-His。pSBETa质粒经XbaI和BamH I限制性内切酶双酶切,获得原核表达载体的骨架。以pET28a(+)为模板,通过高保真PCR法应用T7 promoter引物和T7 terminator引物对pET28a(+)载体T7表达区域进行扩增,PCR产物电泳纯化后经双酶切和纯化获得138 bp含His-Tag序列的片段。将pSBET原核表达载体骨架和含有His-Tag序列的片段进行连接后转入DH5α感受态细胞中,经菌落PCR及酶切筛选构建pSBET-His。成功构建了pSBET-His原核表达载体。应用该载体表达的蛋白质,可采用镍离子亲和层析法进行纯化。该研究为应用pSBET-His载体进行烟草丛顶病毒ORF4的原核表达研究奠定了基础。

关键词(KeyWords): 原核表达载体;pSBET-His;构建

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 云南省烟草公司科技项目(04A18)

作者(Author): 陈正斌;谭仲夏;秦西云;

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