安徽农业科学

2010, v.38;No.291(02) 602-605

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正交优化多重PCR反应体系检测3种食源性致病菌的研究
Application of Orthogonal Design to Optimize Multiplex PCR Reaction System for Detection of Three Food-borne Bacterial Pathogens

郝玉芹;孙皆宜;李艾;杨国兴;张伟;

摘要(Abstract):

[目的]建立金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、志贺氏菌的快速、敏感、特异的多重PCR检测方法。[方法]根据金黄色葡萄球菌的nuc基因、沙门氏菌的IpaB基因、志贺氏菌的ipaH基因,设计3对特异性引物进行多重PCR检测,利用正交设计对多重PCR反应体系的镁离子、Taq酶、dNTP、引物的浓度在4个水平上进行L16(44)优化试验,并确定该检测方法的特异性与灵敏度。[结果]3对引物能特异性扩增出210、280、393 bp的目的条带。利用FTA滤膜提取模板DNA,采用建立多重PCR同时对3种食源性致病菌进行检测具有较高的灵敏度,灵敏度金黄色葡萄球菌为3.5×102cfu/ml、沙门氏菌为2.2×102cfu/ml、志贺氏菌为1.0×102cfu/ml。[结论]该检测方法准确、快速、高效,为同时检测食品中多种致病菌奠定了基础。

关键词(KeyWords): 多重PCR;食源性致病菌;检测;FTA滤膜

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation):

作者(Author): 郝玉芹;孙皆宜;李艾;杨国兴;张伟;

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