豆豉纤溶酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达Cloning of the Douchi Fibrinolytic Enzyme Gene and its Expression in Escherichi coli
陆云华;张新;
摘要(Abstract)：
根据已发表的豆豉纤溶酶基因DNA序列(GeneBank AY720895.2),设计并合成了一对引物,应用PCR技术以筛选的来自豆豉的产纤溶酶的芽孢杆菌的总DNA为模板,扩增出了豆豉纤溶酶基因,并将其克隆到pMD18-T载体上,进行了序列测定,测序结果经Genetool序列分析表明该基因长1 089 bp,编码363个氨基酸,与已发表Brevibacillus laterosporus豆豉纤溶酶基因序列在核苷酸水平上与所发表的序列有98%的同源性;在氨基酸水平上与已发表的芽孢杆菌豆豉纤溶酶同源性为100%。并将该基因克隆到大肠杆菌表达载体pET22b上,在大肠杆菌中实现了高效表达。
关键词(KeyWords)： 豆豉纤溶酶;基因克隆;高效表达
基金项目(Foundation): 江西省教育厅科研项目(编号:2007-314)
作者(Author): 陆云华;张新;
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参考文献(References)：
- [1]中华人民共和国药典委员会编.中华人民共和国药典(一部)[M].广州:广东科学技术出版社,1995:289.
- [2]SUMI H,HAMADA H,TSUSHIMA H.A norel fibrinolytic enzymein the vegetable cheese Natto:a typical and popular soybean foodin the Japanese diet[J].Experientia,1987,43:1-10.
- [3]齐海萍,钱和.高活性豆豉纤溶酶产生菌出发菌株的筛选[J].中国调味品,2004,(2):12-151.
- [4]李江伟,冉国侠,陈新梅.豆豉溶栓酶的分离纯化及其体外溶栓作用[J].中国生化药物杂志,1999,20(3):148-150.
- [5]SAMBROOK J,DAVID W.Molecμlar cloning:a.laboratory manual[M].3rd.New York:Cold Spring Habor Laboratory,2001.
- [6]ASTRUP T,MULLERTZ S.A The fibrin plate method for estimatingfibrinolytic activity[J].Biochem Biophys,1952,40:346-349.