重组毕赤酵母高产木聚糖酶菌株的筛选及诱导条件优化Screening for High-yield Strain of Xylanase Produced by Engineered Pichia pastoris and Optimization of the Methanol Induced Conditions
靖梅贞;黄慧敏;赵纪莹;刘亮伟;陈红歌;
摘要(Abstract):
[目的]筛选重组毕赤酵母高产木聚糖酶菌株并优化其甲醇诱导条件。[方法]用不同浓度的G418 YPD平板筛选高拷贝转化子,不同时间间隔添加不同浓度的甲醇进行木聚糖酶诱导表达。[结果]在G418浓度为10.0 mg/m l时,筛选得到产酶活力最高的16号菌株,以0.5%甲醇于30℃诱导产酶,第6天时酶活力达到最高,为826.2 IU/m l,木聚糖酶比活力达5 229.1 IU/mg;该菌在诱导时间间隔为12 h、诱导浓度为0.8%时,产酶量高且稳定。[结论]该菌是甲醇依赖型的高拷贝高酶活菌株。
关键词(KeyWords): 巴斯德毕赤酵母;木聚糖酶;甲醇诱导
基金项目(Foundation): 河南省重点科技攻关项目(072102220001)
作者(Author): 靖梅贞;黄慧敏;赵纪莹;刘亮伟;陈红歌;
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DOI: 10.13989/j.cnki.0517-6611.2008.29.046
参考文献(References):
- [1]张红莲,姚斌,王亚茹,等.链霉菌Streptomyces olivaceoviridisA1木聚糖酶基因xynA在大肠杆菌及毕赤酵母中的高效表达[J].生物工程学报,2003,19(1):41-45.
- [2]江正兵,宋慧婷,马立新.短小芽孢杆菌木聚糖酶基因在毕赤酵母中的分泌表达及酶学性质研究[J].生物工程学报,2003,19(1):50-55.
- [3]陆健,曹钰,陈坚.运用定点突变提高重组木聚糖酶在毕赤氏酵母中的表达[J].微生物学报,2002,42(4):425-430.
- [4]李春华,李翔,马立新,等.酸性木聚糖酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的分泌表达[J].微生物学通报,2005,32(6):89-95.
- [5]杨梦华,李颖,关国华,等.极端耐热木聚糖酶基因在大肠杆菌和毕赤酵母中的高效表达[J].微生物学报,2005,45(2):236-240.
- [6]BRADFORDM.Arapid and sensitive method forthe quantitationofmicro-gram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding[J].Anal Biochem,1976,72:248-254.
- [7]刘明启,孙建义,翁晓燕,等.重组毕赤酵母产木聚糖酶条件的优化[J].浙江大学学报:农业与生命科学版,2006,32(2):222-226.