安徽农业科学

2019, v.47;No.632(19) 118-120+151

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拟南芥Ib bHLH家族基因CRISPR/Cas9敲除载体的构建
Construction of the Arabidopsis thaliana Ib bHLH Family Genes CRISPR/Cas9 Knockout Vector

樊玲玲;马铭悦;韩毅;

摘要(Abstract):

[目的]全氟辛酸(PFOA)处理能显著诱导拟南芥Ib bHLH(Ib basic helix-loop-helix)家族4个转录因子bHLH38、bHLH39、bHLH100和bHLH101的转录水平。为了进一步分析这4个基因在响应PFOA中的潜在作用,利用CRISPR/Cas9技术构建了它们的共敲除载体。[方法]以野生型拟南芥基因中的外显子为模板,设计引物,通过两步PCR扩增法将靶向基因连接到CRISPR/Cas9载体上;将构建成功的重组质粒转化到大肠杆菌DH5α感受态细胞中,挑取阳性菌落,PCR鉴定正确后,将其质粒转入农杆菌GV3101感受态细胞中,再次挑取阳性菌落进行PCR鉴定正确后,提取质粒进行表达盒测序。[结果]通过两步PCR扩增法,成功将4个靶点表达盒转入到CRISPR/Cas9载体中,构建了bHLH38、bHLH39、bHLH100和bHLH101的双元CRISPR/Cas9敲除载体。[结论]成功构建的Ib BHLH家族CRISPR/Cas9敲除载体,为后续拟南芥Ib BHLH家族四突突变体材料的获得提供了可用性载体。

关键词(KeyWords): 拟南芥;Ib BHLH家族基因;载体构建;CRISPR/Cas9

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家自然科学基金项目(31300225)

作者(Author): 樊玲玲;马铭悦;韩毅;

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参考文献(References):

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