安徽农业科学

2009, v.37;No.v.37(22) 10426-10428

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正交设计优化稻瘟病菌SSR-PCR反应体系
SSR-PCR Reaction System for Magnaporthe oryzae Optimized by Orthogonal Design

张崎峰;靳学慧;张亚玲;蔡鑫鑫;王士磊;

摘要(Abstract):

[目的]筛选最佳的稻瘟菌SSR-PCR反应体系。[方法]利用正交设计对稻瘟菌SSR-PCR反应体系中的5个因素(TaqDNA聚合酶、Mg2+、模板DNA、dNTP、引物)在4个水平上进行优化试验,筛选出各反应因素的最佳水平并进行退火温度梯度试验筛选最佳的退火温度。[结果]稻瘟菌SSR-PCR反应的最佳体系为:反应总体积为20μl,TaqDNA聚合酶1.0 U,Mg2+2.0 mmol/L,DNA100 ng,dNTP50μmol/L,引物(ms355~356)0.4μmol/L,最佳退火温度为58.5℃。在此体系下可从稻瘟菌材料基因组DNA中扩增出300 bp左右清晰的目的条带,说明该体系稳定,适用于稻瘟菌基因组DNA的SSR标记。[结论]该研究为稻瘟菌的分子标记、遗传多样性研究和分子育种奠定了基础。

关键词(KeyWords): 稻瘟病菌;SSR-PCR;体系优化

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 黑龙江省科技攻关项目(GB06B105-2);; 黑龙江省农垦总局科技攻关项目(HNKXIV-01-04-02)

作者(Author): 张崎峰;靳学慧;张亚玲;蔡鑫鑫;王士磊;

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DOI: 10.13989/j.cnki.0517-6611.2009.22.073

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