王林涛;姚笛;

• 1:上海复旦大学生命科学学院
• 2:江苏常州技师学院

摘要(Abstract)：

[目的]研究毕赤酵母菌株(Pichia GS115)表达人C型溶菌酶(H-LYZ)的发酵与分离纯化的工艺。[方法]探讨酵母生长规律,研究不同菌体浓度、不同诱导时间对蛋白产量的影响,并且探讨不同pH条件对DEAE-Sepharose FF和CM-Sepharose FF层析分离纯化目标蛋白的影响。[结果]毕赤酵母菌株表达H-LYZ的最佳发酵条件为:发酵24 h用浓度1%甲醇诱导,以后每12 h用浓度1%甲醇诱导,共6次,在此条件下可获得高产量目标蛋白。DEAE-Sepharose FF和CM-Sepharose FF分离纯化目标蛋白的最佳pH分别为6.65和6.50。[结论]该研究可为人C型溶菌酶的工艺化生产提供理论指导。

关键词(KeyWords)： 人C型溶菌酶;毕赤酵母;发酵;DEAE与CM层析

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation):

作者(Author): 王林涛;姚笛;

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DOI: 10.13989/j.cnki.0517-6611.2014.31.003

参考文献(References)：

• [1]FLEMING A.On a remarkable bacteriolytic element found in tissues and secretion[J].Proc RSoc Land B Biol,1922,93:306-317.
• [2]FORD L D,JOHNSON L N,MACHIN P A,et al.Crystal streucture of a lysozyme-tetrasaccharide lactone complex[J].Mol Biol,1974,8:349.
• [3]常凯,马亮.溶菌酶提取工艺及其在山核桃乳中的应用研究[J].安徽农业科学,2009,37(30):14883.
• [4]SHIGERU M,MASATO K,MASANORI N.Secretion of active human lysozyme by Acremonium chrysogenum using a Fusarium alkaline protease promoter system[J].Journal of Biotechnology,1995,42(1):1-8.
• [5]王利娟,刘誉.溶菌酶及其晚期糖基化终产物(AGEs)与糖尿病并发症的研究[J].临床医学工程,2010,17(5):157-158.
• [6]OSSERMAN E,KLOCKARS M,HALPER G,et al.Effects of lysozyme on normal and transformed mammalian cells[J].Nature,1973,243(5406):331-335.
• [7]WARREN J,RINEHART J,ZWILLING B,et al.Lysozyme enhancement of tumor cell immunoprotection in a murine fibrosarcoma[J].Cancer Res,1981,41(5):1642-1645.
• [8]WOOLEY R E,SCHALL W D,EAGON R G,et al.Efficacy of EDTA-Trislysozyme lavage in the trentment of experimentally in induced Pseudomonas aeruginosa cystitis in the dog[J].Am J Vet Res,1974,35(1):27-29.
• [9]MURAKAMI M,JIGAMI Y,TANAKA H,et al.Expression of synthetic human lysozyme gene in Escherichia coli[J].Agricultural Biological Chemistry,1986,50:713-723.
• [10]王佃亮.重组人溶菌酶研究进展[J].中国生物工程杂志,2003,23(9):59-60.
• [11]常景立,汪少芸,周建武,等.苦瓜溶茵酶的分离纯化及特性研究[J].中国食品学报,2009,9(5):56-58.
• [12]李英辉,丛丽娜,朱蓓薇.海参肠中溶菌酶的分离纯化及其酶学性质[J].大连工业大学学报,2008,27(3):194-195.