安徽农业科学

2012, v.40;No.385(24) 12276-12278

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基因工程实验教学中PCR反应条件的正交优化
Orthogonal Optimization of PCR Experimental System for Escherichia coli DNA in Genetic Engineering Experiment Teaching

刘顺枝;邓剑锋;田长恩;王小兰;胡位荣;

摘要(Abstract):

采用碱裂解法提取大肠杆菌的质粒DNA,检测提取到的DNA浓度和纯度,并以提取的DNA作为PCR反应体系中的模板,采用搜索性正交设计试验法探求PCR反应体系中4个因素(dNTPs、DNA模板、引物和Taq酶)在5个水平上的最适用量,在此基础上,进一步设计细调性正交试验筛选PCR反应的最适条件。结果表明,在20μl PCR反应体系中,DNA模板5 ng/μl,dNTPs 0.25 mmol/L,引物0.6μmol/L,Taq酶1.5 U/μl,Mg2+浓度1.5 mmol/L时,PCR的效果最好。

关键词(KeyWords): 大肠杆菌;PCR反应;正交设计;条件优化;实验教学

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 广东省高等院校学科建设专项资金项目(2008-342);; 广州大学2012年度教育教学研究项目资助

作者(Author): 刘顺枝;邓剑锋;田长恩;王小兰;胡位荣;

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