安徽农业科学

2014, v.42;No.444(11) 3186-3190

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偏肿革裥菌Lg-mnp1基因克隆及表达研究
Cloning of Lg-mnp1 Gene from Lenzites gibbosa and Heterologous Expression

闫洪波;池玉杰;吴书景;

摘要(Abstract):

[目的]研究偏肿革裥菌Lg-mnp1基因的克隆及表达情况。[方法]根据白腐菌锰过氧化物酶(MnP)基因保守序列设计引物,采用PCR、RACE及染色体步移等方法,克隆偏肿革裥菌Lenzites gibbosa CB1的全长MnP1基因(GenBank登录号JQ327834),进行蛋白序列分析,并通过双酶切的方法获得重组质粒,将该重组质粒电转化至巴斯德毕赤酵母中进行异源表达。[结果]获得偏肿革裥菌Lenzites gibbosa CB1的全长MnP1基因,命名为Lg-mnp1。蛋白序列分析表明Lg-MnP1含有4个二硫键属于短MnP,预测成熟蛋白分子量为35.94kD,pI为4.43。通过双酶切的方法将Lg-mnp1的开放阅读框(ORF)序列连接到pPICZB载体上,获得重组质粒pPICZB/Lg-mnp1,转化子经PCR验证后,在BMMY培养基中甲醇诱导培养,在未添加血红素的培养液中MnP胞外酶活在72 h达到最高为7 U/L,表明Lg-mnp1已被转化至毕赤酵母中并可诱导表达。[结论]该方法对偏肿革裥菌Lg-mnp1基因的克隆及表达情况进行研究,为偏肿革裥菌Lg-mnp1基因的进一步应用提供了依据。

关键词(KeyWords): 偏肿革裥菌;锰过氧化物酶;基因克隆;毕赤酵母;基因表达

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家自然科学基金项目(30671700)

作者(Author): 闫洪波;池玉杰;吴书景;

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DOI: 10.13989/j.cnki.0517-6611.2014.11.005

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