安徽农业科学

2009, v.37;No.281(28) 3510-3513

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植物病毒表达载体pClYVV/CP/W的构建及GFP表达的研究
Study on Construction of Plant Virus Expression Vector pC1 YVV/CP/W and Expression of GFP

王振东;王晓华;孟鹏;秦会权;郑新伟;刘芳普;薛立江;张敏;

摘要(Abstract):

[目的]研究植物病毒表达载体pC1YVV/CP/W的构建及用pC1YVV/CP/W表达绿色荧光蛋白(GFP),为植物反应器生产有用蛋白、开发有效的植物病毒载体提供参考。[方法]用三叶草黄脉病毒侵染性全长cDNA克隆pC1YVV基因组的Mb/CP基因之间的一段多克隆位点和两侧含有病毒蛋白酶NIa切割识别序列的多聚脱氧核糖核苷酸接头,构建pC1YVV/CP/W载体,并将绿色荧光蛋白基因插入pC1YVV/CP/W中构建pC1YVV/CP/W/GFP载体,用反转录PCR对重组病毒克隆转录情况进行检测,并用Western杂交对重组病毒克隆表达的目的基因产物进行测定。[结果]pC1YVV/CP/W/GFP接种的蚕豆幼苗表现出与野生型C1YVV相同的症状,发病率达100%,表明重组病毒克隆pClYVV/CP/W/GFP有侵染性,外源基因的插入没有破坏载体pClYVV/CP/W的开放阅读框;外源基因在F_4子代病毒基因组中稳定存在;重组病毒克隆pC1YVV/CP/W/GFP至少到F_4子代病毒能稳定表达GFP。[结论]该研究结果为用植物表达有用蛋白提供了有用的植物病毒载体。

关键词(KeyWords): 植物病毒表达载体;pC1YVV/CP/W;pC1YVV/CP/W/GFP;构建;表达

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 辽宁省自然基金资助项目(20072122);; 辽宁省教育厅资助项目(05L339)

作者(Author): 王振东;王晓华;孟鹏;秦会权;郑新伟;刘芳普;薛立江;张敏;

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