安徽农业科学

2012, v.40;No.387(26) 12915-12916

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鸡新城疫病毒F基因片段的原核表达及其抗F蛋白单克隆抗体的制备
Prokaryotic Expression of Fragment of Chicken NDV-F Gene and Preparation of Its Monoclonal Antibody

孟凡涛;陈芳芳;余为一;

摘要(Abstract):

[目的]制备鸡新城疫病毒(NDV)融合蛋白(F)抗原的单克隆抗体。[方法]克隆和表达了NDV-F蛋白基因的部分片段F306,经杂交瘤技术制备了抗F蛋白的单克隆抗体。[结果]首先根据F基因和载体pGEX-4T-1的多克隆位点自行设计了1对引物,以保存的重组质粒为模板,通过PCR扩增获得长度为306 bp的片段,再将其定向插入pGEX-4T-1,构建重组质粒pGEX-4T-1-F306。其次经原核表达获得大小为35.8 kD的融合蛋白,提纯后免疫Balb/c小鼠。最后,用免疫鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,经ELISA筛选和3次亚克隆获得2株稳定传代和分泌抗NDV-F的抗体的杂交瘤细胞株。连续传代10次后,细胞上清和腹水的抗体效价仍维持在1∶5 124和1∶64 000以上。[结论]获得了2株稳定分泌抗鸡NDV-F抗体的杂交瘤细胞。

关键词(KeyWords): 新城疫病毒;F蛋白;原核表达;单克隆抗体

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家自然科学基金项目(30671537)

作者(Author): 孟凡涛;陈芳芳;余为一;

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