安徽农业科学

2011, v.39;No.331(06) 3607-3609+3629

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副猪嗜血杆菌实时荧光PCR快速检测方法的建立和应用
Development of Real-Time Fluorescent PCR for Rapid Detection of Haempohlius parasuis

李军;谢宇舟;禤雄标;陈泽祥;杨威;马春霞;胡帅;彭昊;许力干;谢永平;潘艳;

摘要(Abstract):

[目的]建立一种快速准确定量检测副猪嗜血杆菌(HPS)的检测方法。[方法]根据GenBank公布的副猪嗜血杆菌16 S rRNA基因序列,选择其保守区域设计1对特异性引物。通过优化引物浓度和退火温度,建立快速定量检测副猪嗜血杆菌的实时荧光PCR方法,并评价了其特异性和稳定性。[结果]建立的实时荧光PCR方法最低检测限是50拷贝/μl,重复性好,变异系数均小于2%。该方法特异性强,只能检测副猪嗜血杆菌,不能检测到猪链球菌2型、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌DH5α和猪伤寒沙门氏菌。采用该方法对10份临床疑似HPS感染样本进行检测,其结果与细菌分离培养和常规PCR的结果一致。[结论]建立的实时荧光PCR方法快速、灵敏、特异、重复性高,可用于HPS感染的临床快速检测。

关键词(KeyWords): 副猪嗜血杆菌;实时荧光PCR;16S rRNA

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 广西科技攻关项目(桂科攻0993009-1)

作者(Author): 李军;谢宇舟;禤雄标;陈泽祥;杨威;马春霞;胡帅;彭昊;许力干;谢永平;潘艳;

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DOI: 10.13989/j.cnki.0517-6611.2011.06.213

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