安徽农业科学

2016, v.44;No.538(33) 137-139+142

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山楂PCR-SSCP反应体系与反应条件的优化
Optimization of PCR-SSCP Reaction System and Reaction Condition in Crataegus spp.

撒云俐;那冬晨;

摘要(Abstract):

[目的]优化山楂PCR-SSCP反应体系与反应条件。[方法]以山楂为材料,采用改良的CTAB法分步提取叶绿体DNA和核DNA,对PCR-SSCP引物进行筛选,同时进行PCR-SSCP反应体系和反应条件的优化,琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物,非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测变性后的PCR扩增产物。[结果]rop B、rop L、rpo C1、ITS2、psb A-trn H 5对引物适用于山楂PCR-SSCP分析。电泳时,采用6%聚丙烯酰胺凝胶(交联度29∶1),4℃恒温,200 V恒压,上样缓冲液(不含甘油)与PCR产物等量混合,98℃碱(1%Na OH)变性15 min,电泳缓冲液为0.5×TBE,电泳3~4 h可得到较好的山楂PCR-SSCP电泳图谱。[结论]建立了山楂PCR-SSCP最优反应体系与反应条件,为山楂SSCP分析奠定基础。

关键词(KeyWords): 山楂;PCR-SSCP;引物;反应体系;反应条件

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基金项目(Foundation):

作者(Author): 撒云俐;那冬晨;

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参考文献(References):

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