安徽农业科学

2012, v.40;No.389(28) 13709-13712+13719

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老芒麦ISSR-PCR反应体系的建立与优化
Establishment and Optimization of ISSR Reaction System for Elymus sibiricus L.

周国栋;李志勇;扈顺;李鸿雁;师文贵;刘磊;

摘要(Abstract):

[目的]建立并优化老芒麦ISSR-PCR反应体系和扩增程序,以期为探讨老芒麦种质资源的遗传多样性提供科学依据。[方法]采用正交设计试验和单因素试验相结合的方法对老芒麦的ISSR-PCR的反应体系进行构建和优化,对影响ISSR-PCR扩增效果的Taq酶、模板DNA的浓度、Mg2+、dNTP和引物浓度等因素进行优化,同时对退火温度、循环次数和延伸时间进行筛选。[结果]在25μl体系中各反应物的最适含量为:0.2 mmol/L dNTP,0.2μmol/L ISSR引物,1.50 U Taq DNA聚合酶,2.5μl 10×PCR Buffer,1.5 mmol/L MgCl2和40 ng模板DNA;循环次数和延伸时间分别是35次和90 s。[结论]该研究建立并优化了老芒麦ISSR-PCR反应体系,通过2份老芒麦种质对所优化体系得验证,结果显示体系稳定,可用于老芒麦种质资源遗传分析。

关键词(KeyWords): 老芒麦;ISSR;正交试验;单因素试验

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 多年生牧草种质资源收集、编目与利用项目(NB2012-2130-135-33);; 牧草种质资源保护项目

作者(Author): 周国栋;李志勇;扈顺;李鸿雁;师文贵;刘磊;

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DOI: 10.13989/j.cnki.0517-6611.2012.28.124

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