安徽农业科学

2010, v.38;No.298(09) 4610-4613

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金堂黑山羊FSHR启动子克隆及转录活性分析
Cloning and Transcriptional Activity Analysis of Follicle-Stimulating Hormone Receptor Promoter in the Jintang Black Goat

梁天宇;李键;曹冶;

摘要(Abstract):

[目的]分析金堂黑山羊FSHR启动子的克隆和转录活性,为分子水平研究金堂黑山羊FSHR的可变剪接提供基础。[方法]从金堂黑山羊子宫中提取总的DNA,设计1对引物用于扩增FSHR启动子片段,并进行测序和同源性分析。将克隆得到的FSHR启动子片段替换CMV启动子构建pcFSHRB2表达载体,分别将pcFSHRB1和pcFSHRB2表达载体转染到HEK293细胞中,用2mIU/mlFSH处理细胞,在处理后24、48h分别检测环磷酸腺苷(cAMP)的产量,用以分析FSHR的转录活性。[结果]克隆得到的FSHR启动子序列与鸡和家鼠的同源性分别为34.2%和41.6%,推测其转录起始位点为-576bp处,其上游含有2个TATA-box、4个CAAT-box、1个E-box和1个W1-box。所构建的pcFSHRB2和pcFSHRB1表达载体转染细胞后用FSH处理24和48h时产生的cAMP的量分别为299.5813、125.5281pmol/L和120.0571、109.9407pmol/L。[结论]金堂黑山羊的FSHR启动子是一个典型的Ⅱ型真核启动子,是一个强启动子。

关键词(KeyWords): 金堂黑山羊;FSHR启动子;表达载体;环磷酸腺苷

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 四川省畜禽水产育种攻关项目

作者(Author): 梁天宇;李键;曹冶;

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参考文献(References):

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