安徽农业科学

2013, v.41;No.430(33) 12819-12822

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抗ICOSL核糖体展示单链抗体库的构建
Construction of Anti-ICOSL Ribosome Display Library

严浩;王芳;毛伟平;王文倩;孟素芳;邵峦峦;刘小綪;

摘要(Abstract):

[目的]构建出鼠源抗ICOSL核糖体展示抗体库。[方法]通过RT-PCR从人B淋巴瘤细胞Daudi的总RNA中扩增出ICOSL胞外区基因,并将此基因插入到原核表达载体pET28a中进行表达。以表达纯化的ICOSL蛋白为抗原免疫Balb/c小鼠,取小鼠脾脏提取总RNA,通过RT-PCR扩增小鼠的重链可变区和Linker(VH-linker)序列,以及轻链可变区和Linker(Vκ-linker)序列。经重组PCR将两段基因连接起来,将VH/κ与pMD19-T载体链接产物转化E.coli DH 5α,PCR鉴定并测序。[结果]VH和κ链得到正确的扩增,长度分别为421和689 bp,VH/κ连接产物正确,连接产物长度为1 079 bp。[结论]所采用的引物及反应条件能够扩增出目的基因,成功构建了鼠源抗ICOSL核糖体展示抗体库,为进行核糖体展示体外筛选抗ICOSL特异性单链抗体奠定基础。

关键词(KeyWords): ICOSL(可诱导共刺激因子配体);单链抗体;核糖体展示技术;原核表达

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation):

作者(Author): 严浩;王芳;毛伟平;王文倩;孟素芳;邵峦峦;刘小綪;

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