玉米品种真实性鉴定中SSR技术体系的优化Optimization on SSR Marker Technology for Authenticity Identification of Maize Varieties
刘勋辉;陆徐忠;钟昌松;马卉;汪名春;李莉;杨剑波;
摘要(Abstract):
[目的]优化玉米品种真实性鉴定中的SSR技术体系。[方法]以11份玉米骨干自交系为材料,通过对影响SSR扩增质量的Mg2+、dNTPs、引物、TaqDNA聚合酶的浓度等因素进行优化和比较,建立了适于玉米品种真实性鉴定的SSR标记技术体系,并以5个玉米杂交种为例,验证该体系在玉米杂交种真实性鉴定中的可行性。[结果]Mg2+浓度为2.5 mmol/L时,扩增效果最佳。dNTPs浓度为0.3 mmol/L时,扩增效果最好。引物浓度为0.2μmol/L较为适宜。TaqDNA聚合酶浓度为1.0 U时,扩增效果较好。优化后的PCR反应体系为:1×PCR缓冲液,2.5 mmol/LMg2+,0.3 mmol/L dNTPs,0.2μmol/L正、反向引物,1.0 UTaqDNA聚合酶,40 ng样品DNA,总体积25μl。[结论]该研究优化的SSR技术体系可以有效地对玉米杂交种进行真实性鉴定。
关键词(KeyWords): 玉米;SSR标记;真实性鉴定
基金项目(Foundation):
作者(Author): 刘勋辉;陆徐忠;钟昌松;马卉;汪名春;李莉;杨剑波;
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DOI: 10.13989/j.cnki.0517-6611.2008.15.071
参考文献(References):
- [1]SMITH J S C,CHIN E C L,SHU H,et al.An evaluation of the utility of SSRloci as molecular markers in maize(Zea maysL.):Comparison with data fromRFLPs and pedigree[J].Theor Appl Genet,1997,95:163-173.
- [2]国家技术监督局,国家质量监督检验检疫总局.三系杂交水稻及亲本真实性和品种纯度鉴定DNA分析方法(GBT20396-2006)[S].北京:中国标准出版社,2006.
- [3]李晓辉,李新海,李文华,等.SSR标记技术在玉米杂交种种子纯度测定中的作用[J].作物学报,2003,29(1):63-68.
- [4]王凤格,赵久然,郭景伦,等.中国玉米新品种DNA指纹库建立系列研究Ⅰ.玉米品种纯度及真伪鉴定中SSR技术标准实验体系的建立[J].玉米科学,2003,11(1):3-6.
- [5]中华人民共和国农业部.NY/T674-2003转基因植物及其产品成分检测DNA提取和纯化[S].北京:中国标准出版社,2003.
- [6]中华人民共和国农业部.GB/T 3543.1-3543.7-1995.农作物种子检验规程[S].北京:中国标准出版社,1995.
- [7]段运平,陈卫国,李明顺,等.利用SSR标记分析27个玉米群体的遗传关系[J].中国农业科学,2006,39(6):1102-1113.
- [8]KALINKA CARLA PADOVANI,DE CARVALHO SALGADO,MARIA DASGRACAS,et al.Genetic purity certificate in seeds of hybrid maize using molecu-lar markers[J].Revista Brasileira de Sementes,2006,28(1):169-175.
- [9]曹仪植.植物分子生物学[M].北京:高等教育出版社,2002.