安徽农业科学

2013, v.41;No.415(18) 7742-7744+7977

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MCL-1原核表达载体构建及重组蛋白表达
Preparation of Prokaryotic Expression Construct of Bufo japonicus formosus MCL-1 and Its Recombinant Protein Expression

余美华;张姝芳;倪晓敏;袁进强;胡巧玲;万文彬;杨仙玉;

摘要(Abstract):

[目的]构建日本蟾蜍(Bufo japonicus formosus)髓细胞白血病基因-1(myeloid cell leukemia-1,mcl-1)的原核表达载体并诱导其重组蛋白表达。[方法]通过PCR方法扩增日本蟾蜍皮肤mcl-1开放阅读框,将其插入到原核表达载体pET-28b中。经菌落PCR、DNA限制性内切酶消化筛选阳性克隆,并通过DNA测序确定原核表达载体pET-28b-mcl-1构建成功。将pET-28b-mcl-1转入大肠杆菌(E.coli)感受态细胞BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达,并用SDS-PAGE对重组蛋白的表达进行检测。[结果]原核表达载体pET-28b-mcl-1构建成功;重组蛋白在大肠杆菌中成功表达。[结论]原核表达载体的构建及重组蛋白的表达,为后续MCL-1的纯化、抗血清的制备及生理功能检测奠定了基础。

关键词(KeyWords): MCL-1;原核表达载体;重组蛋白表达

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家自然基金项目(31071181);; 2011年度浙江省科技创新活动计划项目(2011R412042)

作者(Author): 余美华;张姝芳;倪晓敏;袁进强;胡巧玲;万文彬;杨仙玉;

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