安徽农业科学

2006, (13) 2980-2982

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正交优化法建立沙打旺ISSR-PCR最佳反应体系
Establishment of Astragalus adsurgens' ISSR-PCR Optimal Conditions with Orthogonal Optimization Method

陈志宏;黄琳凯;张新全;王志刚;

摘要(Abstract):

根据正交试验设计的原理,设计了探索性正交试验和细调性正交试验来确定沙打旺ISSR-PCR体系中各成分的浓度。得到既稳定又能扩出最多条带的适合沙打旺的ISSR-PCR最佳反应体系,即20μl的反应体系中含有1×buffer,dNTP 0.2 mmol/L,Taq酶1.0 U,引物0.3μmol/L,Mg2+2.5 mmol/L,DNA模板2.5 ng/μl。然后对沙打旺ISSR-PCR最佳反应体系进行梯度退火试验,得到这条引物的最佳退火温度为54.1℃。这一最佳体系的建立为今后利用ISSR标记技术,研究沙打旺的遗传多样性提供了标准化程序。

关键词(KeyWords): 沙打旺;ISSR;正交优化;反应体系

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation):

作者(Author): 陈志宏;黄琳凯;张新全;王志刚;

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