安徽农业科学

2010, v.38;No.299(10) 5002-5005

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优化反向PCR法分离转基因油菜外源T-DNA侧翼序列的研究
Study on the Isolation of the Flanking Sequences Adjacent to Transgenic T-DNA in Brassica napus Genome by an Improved Inverse PCR Method

杨坤;吴学龙;朗春秀;陈锦清;

摘要(Abstract):

[目的]优化反向PCR(IPCR)条件分离油菜转基因外源T-DNA的侧翼序列。[方法]以单拷贝的转基因油菜FS4为研究材料,用改良CTAB法提取转基因油菜总DNA,并进行酶切、纯化、自连接,再通过两轮巢式PCR扩增,进行序列对比。[结果]两轮巢式PCR扩增得到1个大小为4.0kb的片段,其序列与油菜数据库中BH652424和BZ044084两序列同源性分别高达97.8%和63.4%。根据序列比对结果设计特异引物对进行PCR验证的结果,也证明了FS4转基因油菜中T-DNA的确插入在该位点。[结论]优化后的IPCR条件能成功分离油菜转基因外源T-DNA的侧翼序列。

关键词(KeyWords): 反向PCR;侧翼序列;改良CTAB法;转基因油菜

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家“863”计划项目(2006AA10A113);; 浙江省自然科学基金项目(Y306097)

作者(Author): 杨坤;吴学龙;朗春秀;陈锦清;

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DOI: 10.13989/j.cnki.0517-6611.2010.10.076

参考文献(References):

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