安徽农业科学

2009, v.37;No.282(29) 14044-14046+14050

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寒兰基因组DNA ISSR-PCR反应条件的优化
Optimization of ISSR-PCR Reaction Conditions for Genomic DNA from Cymbidium kanran Makino

孙小琴;李恩香;贾文杰;彭德镇;孔令杰;杨柏云;

摘要(Abstract):

以改良的CTAB法提取的寒兰(Cymbidium kanran Makino)基因组DNA为模板,通过单因子试验建立最适的寒兰的ISSR-PCR反应体系。结果表明,适宜寒兰ISSR-PCR反应体系的扩增条件为:25μlPCR反应体积中,1×PCR buffer,2.0 mmol/LMgCl2,300 ng模板DNA,200μmol/LdNTP,1.40 UTaqDNA聚合酶,0.4μmol/L引物。最佳扩增程序为:94℃预变性5min,然后进行40个循环:94℃变性30s,复性温度根据各引物的Tm值略低1~2℃,30 s,72℃延伸50s,循环结束后72℃延伸7min。

关键词(KeyWords): 寒兰;ISSR-PCR反应;遗传多样性

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 江西省教育厅科学技术研究项目(GJJ09054)

作者(Author): 孙小琴;李恩香;贾文杰;彭德镇;孔令杰;杨柏云;

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DOI: 10.13989/j.cnki.0517-6611.2009.29.103

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