任文彬;张世清;黄俊生;

• 1:中国热带农业科学院环境与植物保护研究所
• 2:仲恺农业工程学院

摘要(Abstract)：

使用RT-PCR方法,从高毒力金龟子绿僵菌Metarhizium anisopliaeHN1中,克隆得到一个全长为1 275 bp的几丁质酶基因,经Blast分析此基因序列与M.anisopliaeE6的chi1基因(AF02749)同源率为96%。将此基因克隆到pGEX-6p-1载体上,使之与载体上一个约26kD大小的谷胱甘肽S-转移酶(GST)相连,构建pGEX-chi融合表达载体,转化到大肠杆菌(Escherichia coli)BL 21中,经SDS-PAGE结果分析显示:表达出的融合蛋白大小为68 kD,此目的蛋白占表达总量的64.5%。经破碎处理后可检测到几丁质酶活性。

关键词(KeyWords)： 金龟子绿僵菌;几丁质酶基因;融合蛋白;大肠杆菌

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家科技支撑计划(2007BAD48B00)

作者(Author): 任文彬;张世清;黄俊生;

Email:

DOI: 10.13989/j.cnki.0517-6611.2009.17.077

参考文献(References)：

• [1]王清海,万平平,黄玉杰,等.虫生真菌在害虫生物防治中的应用研究[J].山东科学,2005,18(4):37-41.
• [2]裘晖,吴振强,梁世中.金龟子绿僵菌及其杀虫机理[J].农药,2004,43(8):342-345.
• [3]黄勃,樊美珍,李增智.绿僵菌属系统分类的研究进展(综述)[J].安徽农业大学学报,2002,29(2):169-172.
• [4]王海川,尤民生.绿僵菌对昆虫的入侵机理[J].微生物学通报,1999,26(1):71-72.
• [5]CHARNLEY A K,ST LEGER R J.Fungal spore disease initiation in plants andanimals[M].New York:Plenum Press,1991:267-287.
• [6]裴炎,方卫国,张永军.昆虫病原真菌致病寄主的机制和基因工程改良[J].农业生物技术学报,2003,11(3):221-226.
• [7]JOHI L,ST LEGER R J,ROBERTS D W.Isolation of a cDNA encoding a novelsubtilisin-like protease(PrlB)from the entomopathogenic fungus,Metarhiziumanisopliaeusing differential display RT-PCR[J].Gene,1997,197:1-8.
• [8]STLEGER R J,STAPLES R C,ROBERTS D W.Cloning and regulatory analysisof starvation-stress gene,ssgA,encoding a hydrophobin-like protein from the en-tomopathogenic fungus,Metarhizium anisopliae[J].Gene,1992,120(1):119-124.
• [9]MARCIA VANUSA DA SILVA,LUCELIA SANTI,CHARLEY CHRISTIANSTAATS,et al.Cuticle-induced endo/exoacting chitinase CHIT30 fromMetarhixium anisopliaeisencoded by an ortholog of thechi3 gene[J].Researchin Microbiology,2005,156(3):382-392.
• [10]JOSEPHSAMBROOK,RUSSE D W.Molecular cloning[M]:ALaboratoryMan-ual 3rd.Science Publishing Company,2002.
• [11]SUN CHUL KANG,SANGGYU PARK,DONG GYU LEE.Purification andcharacterization of a novel chitinase from the entomopathogenic fungusMetarhizium anisopliae[J].Journal of Invertebrate Pathology,1999,73(3):276-281.
• [12]李力,黄胜元,关雄.产几丁质酶的苏云金杆菌菌株筛选及酶合成条件的研究[J].中国病毒学,2000,15(1):94-97.
• [13]汪家政,范明.蛋白质技术手册[M].北京:科学出版社,2002.
• [14]周宇荀,魏东芝,王二力.融合蛋白表达载体pGEX及其应用[J].生命科学,1998,10(3):122-124.
• [15]谢磊,孙建波,张世清.大肠杆菌表达系统及其研究进展[J].华南热带农业大学学报,2004,10(2):16-20.