安徽农业科学

2020, v.48;No.646(09) 113-116

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鸡细小病毒与H9亚型禽流感病毒二重PCR检测方法的建立
Development of a Duplex RT-PCR Assay for Detection of ChPV and AIV H9 Subtype

李丹;谢芝勋;李孟;罗思思;谢丽基;张民秀;黄娇玲;范晴;王盛;谢志勤;邓显文;曾婷婷;张艳芳;

摘要(Abstract):

[目的]建立一种能够同时诊断鸡细小病毒(chincken parvovirus,ChPV)和H9亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)的检测方法。[方法]根据GenBank中已发表的ChPV NS基因、H9亚型AIV HA基因的保守序列,分别设计多对引物,并通过一系列不同组合对温度和反应体系的调整试验,最终筛选出2对最佳特异性引物组合,建立了ChPV和AIV二重PCR检测方法用于ChPV和H9亚型AIV的检测。[结果]特异性和敏感性的试验结果表明,建立的二重PCR方法特异性良好,可以在一管PCR反应同时检测ChPV和H9亚型AIV。针对ChPV NS基因和H9亚型AIV HA基因的扩增片段大小分别为558和367 bp,其他常见的禽病病原体均未见阳性反应;该法对ChPV和H9亚型AIV的检测下限均为5×10~4拷贝/μL质粒;临床样品检测结果表明,对140份临床样品检测结果与AIV分离测序及ChPV PCR阳性产物测序结果完全一致。[结论]建立的ChPV和H9亚型AIV二重PCR检测方法不仅特异性良好,而且检测的灵敏度高,对ChPV和H9亚型AIV的监测及有效防控具有重要意义。

关键词(KeyWords): 鸡细小病毒;H9亚型禽流感病毒;二重PCR

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 广西科技基地和人才专项项目(桂科AD17195083);; 广西科技重大专项(桂科AA17204057);; “广西八桂学者”专项(2019-79);; 国家“万人计划”领军人才专项(2016-37-88)

作者(Author): 李丹;谢芝勋;李孟;罗思思;谢丽基;张民秀;黄娇玲;范晴;王盛;谢志勤;邓显文;曾婷婷;张艳芳;

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DOI:

参考文献(References):

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